Tests cytologiques
L’envoi d’échantillons biologiques doit respecter les protocoles établis par le service de messagerie ou de transport utilisé. Dans certains cas, le transport aérien exige le respect de la réglementation de l’Association internationale du transport aérien (IATA) relative aux matières dangereuses.
Dans le cas d’effets de masse superficiels, le prélèvement à l’aiguille fine (c’est-à-dire l’aspiration ou la technique d’extraction de noyaux/« pivert ») présente généralement un meilleur rendement diagnostique et est plus représentatif de la lésion primaire que les échantillons obtenus par impression de surface. Les frottis d’impression sont susceptibles d’être contaminés par des débris et la flore cutanée ou environnementale, ou peuvent ne représenter qu’une inflammation ou une infection secondaire.
Le matériel aspiré doit être étalé en monocouche (c’est-à-dire qu’environ la moitié des cellules se touchent sans se chevaucher) après son application sur la lame (Images de lymphocytes 1 et de cellules mésenchymateuses 2)
La méthode d’étalement privilégiée consiste en un étalement horizontal doux à l’aide d’une seconde lame placée sur le matériel après son dépôt sur la lame inférieure (voir image 3, préparation optimale). Cette technique est supérieure à la technique pull-apart verticale (voir image 4, préparation pull-apart).
La densité excessive des échantillons et la cytolyse inhibent la capacité d’évaluer correctement les cellules des échantillons cytologiques (voir les diapositives Densité excessive des échantillons au faible grossissement 5 et au fort grossissement 6 ; voir aussi la diapositive Cytolyse excessive (lyse cellulaire) 7 ). Seules les cellules intactes peuvent être évaluées cytologiquement, car la cytolyse introduit des artefacts pouvant simuler une malignité, tels que l’augmentation de la taille des noyaux et l’augmentation de la proéminence des nucléoles.
Tant la technique pull-apart que l’absence d’effort pour étaler le matériel (c’est-à-dire le simple séchage à l’air de matériel biologique déposé sous forme de goutte) sont propices à une densité excessive de l’échantillon et à la cytolyse, et peuvent ne pas être diagnostiques (voir échantillon dense sans étalement sur lame 8).
Les échantillons à composante fluide peuvent être étalés de la même manière que les frottis sanguins. Les liquides très cellulaires peuvent être étalés directement ; les liquides à faible cellularité doivent être centrifugés pour concentrer les cellules.
Les lames doivent être conservées à température ambiante et protégées de la poussière, ainsi que d’une humidité excessive et d’une exposition prolongée à la lumière. Il est important d’étiqueter physiquement les lames avec l’identification du patient, ainsi que l’origine de l’échantillon cytologique ; étiqueter uniquement les boîtes ou cartons de lames n’est pas fiable, car les lames peuvent se séparer des récipients ou ceux-ci peuvent être réutilisés.
Les échantillons contenant un excès d’ultrasons ou de gel lubrifiant peuvent ne pas être diagnostiques, car ce matériau est opaque au microscope et masque les cellules, en plus de provoquer une mauvaise captation de la coloration cellulaire.
D’autres considérations pratiques pour la préparation des échantillons cytologiques consistent à toujours utiliser des lames fraîches, à éviter l’utilisation de lamelles et de ruban adhésif en acétate, et à s’assurer que le matériel cellulaire est déposé vers le centre d’une seule face de la lame (voir l’échantillon sur les deux faces de la lame 9).
À mesure que la numérisation des lames se généralise dans les laboratoires de diagnostic, il n’est pas possible pour un pathologiste de simplement retourner la lame sur son microscope pour faire la mise au point sur le matériel de la lame opposée. En outre, si le matériel des deux faces se chevauche, l’effet net peut être un matériel trop épais pour être évalué correctement
L’exposition de frottis sanguins et cytologiques à la formaline ou aux vapeurs de formaline (y compris la proximité de flacons de formaline scellés) interférera avec une coloration et une évaluation adéquates, ce qui peut donner lieu à un échantillon non diagnostique. Ces préparations sur lame ne doivent jamais être envoyées au laboratoire dans le même colis que les tissus fixés à la formaline.
Les frottis non fixés et séchés à l’air conviennent généralement à la coloration immunocytochimique (ICC) ; toutefois, dans certains cas, il est recommandé d’envoyer les échantillons dans des tubes contenant des milieux de transport. Si des colorations spéciales, y compris la CCI, sont prévues, il convient de contacter le laboratoire avant l’envoi afin de s’assurer que le protocole spécifique de votre laboratoire est suivi.