Pruebas Histológicas
El envío de especímenes biológicos debe cumplir los protocolos establecidos por el servicio de mensajería o transporte utilizado. En algunos casos, el transporte aéreo requiere el cumplimiento de la normativa de la Asociación Internacional de Aviación y Transporte (IATA) para materiales peligrosos.
Los tejidos para examen microscópico recogidos mediante biopsia o durante la necropsia pueden ser fundamentales para obtener un diagnóstico. La inmunohistoquímica (IHC) y otras pruebas avanzadas que pueden aplicarse a tejidos fijados en formol refuerzan aún más la utilidad de la evaluación histológica como técnica diagnóstica.
Los tejidos autolizados suelen ser inútiles para la evaluación histológica; la necropsia rápida y la toma de muestras de órganos son fundamentales.
Los tejidos no deben congelarse antes de la fijación.
Aparte de los tejidos del SNC, las muestras recogidas para la evaluación histológica nunca deben tener más de 1 cm de grosor (preferiblemente 5-7 mm) y deben colocarse inmediatamente en ≥ 10 veces su volumen de formol al 10% tamponado con fosfato para garantizar una fijación adecuada.
Los tejidos deben ser representativos de cualquier lesión presente y, en el caso de las biopsias cutáneas en sacabocados y las biopsias obtenidas mediante recogida endoscópica, estar centrados directamente en las lesiones groseramente visibles.
Las biopsias en cuña o las muestras de tejido recogidas en la necropsia deben incluir parte del tejido circundante aparentemente normal; la interfaz entre el tejido normal y el anormal puede proporcionar información clave.
Las biopsias por escisión de tumores pequeños (< 1,5 cm) pueden cortarse por la mitad. Los tumores más grandes pueden cortarse en rebanadas como pan para que el formol pueda penetrar hasta la cara de cada rebanada. Alternativamente, pueden recogerse varias muestras representativas (de 7 mm de ancho, incluida la interfase de lo normal y lo anormal).
En lugar de enviar grandes volúmenes de formol, las muestras de tejido pueden fijarse internamente durante al menos 24 horas en un volumen adecuado y luego transferirse a un volumen menor de formol fresco para su envío.
La presentación de tejido almacenado en formol es aceptable en cualquier plazo, aunque la calidad de la muestra se degradará con el tiempo. La fijación prolongada en formol puede afectar negativamente a las pruebas avanzadas; por ejemplo, no se recomienda realizar pruebas inmunohistoquímicas con tejidos que hayan estado almacenados en formol durante más de 7 semanas, ya que los resultados podrían no ser válidos.
Las muestras deben enviarse en recipientes irrompibles aprobados por el laboratorio con tapas de rosca y embaladas de manera que se evite su derrame o congelación durante el envío (véase Embalaje de muestras para envío).
Los tejidos específicos recogidos en la necropsia requieren una atención adicional:
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- Dado que la mucosa gastrointestinal se descompone rápidamente, las secciones cortas de intestino recogidas en la necropsia deben abrirse longitudinalmente para permitir una fijación adecuada.
- Si se presenta la médula espinal, debe practicarse una incisión longitudinal cuidadosa en la duramadre para permitir una penetración más rápida en la médula.
- La fijación del encéfalo plantea un dilema especial, sobre todo si no se ha podido determinar antemortem la localización neuroanatómica de las lesiones dentro del órgano.
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- Idealmente, se requiere un cerebro entero, intacto y fijado para una evaluación histológica completa.
- La inmersión del cerebro durante muchos días en un gran volumen de formalina es necesaria para una fijación adecuada; por consiguiente, los cerebros se transportan normalmente en un estado sólo parcialmente fijado. Si el espécimen puede enviarse de un día para otro, puede ser aceptable enviar un cerebro refrigerado, cuidadosamente empaquetado y sin fijar, que luego puede procesarse en el laboratorio de diagnóstico.
- A menudo, el cerebro se divide longitudinalmente por la mitad y una mitad se envía sin fijar (fresco), debidamente refrigerado, para realizar pruebas microbiológicas, mientras que la otra mitad se fija parcialmente durante el transporte. Este método puede resultar insatisfactorio si se trata de una lesión unilateral solitaria. El corte del encéfalo en porciones adecuadas para una fijación rápida introduce considerables artefactos de fijación y debe evitarse en la medida de lo posible; es preferible fijar el encéfalo intacto (o dividido por la mitad) en un gran volumen de formol durante > 24 horas.
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